細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

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公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供最新價(jià)格、說(shuō)明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。公司產(chǎn)品僅用于科研，不得用于臨床．

注意事項(xiàng)：
1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
2.收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
腺苷酸環(huán)化酶9抗體

細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mLFERRICAMMONIUMSULFATEDODECAHYDRATE鐵,十二水ACS級(jí)淡紫色結(jié)晶粉末RTsigma

T24-EGFP(CMV-EGFP慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)人膀胱癌細(xì)胞 T24-EGFP (CMV-EGFP leiviral consuct stable sain) of human bladder cancer cells 1640+10% FBS錄代壬烷 1-CHLORONONcNq 473-01-0

IL12A Protein Human 重組人 IL12A / NKSF1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)A-KETOGLUTARICACIDDIwo7iumANxy7noUSα-酮戊二酸二鈉,無(wú)水試劑級(jí)白色粉末COLDsigma

人腦血管平滑肌細(xì)胞 (HBVSMC)( 5×105 ) 人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 MCF-7(MCF7)(ATCC來(lái)源), 人癌細(xì)胞赤霉素GA4+7，英文名或英文縮寫：Gibberllin A4+7，級(jí)別：USP級(jí)，940u/mg，規(guī)格：300u

CM-R049大鼠內(nèi)膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL(L-乳酸)
CD5 Others Mouse 小鼠 CD5 / LEU1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 綿馬酸ABA（標(biāo)準(zhǔn)品）Filixic acid ABA質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

人胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞;CFPAC-1莫諾苷Morroniside質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%，標(biāo)準(zhǔn)品

ERBB2 Others Mouse 小鼠 HER2 / ErbB2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 牡荊素(標(biāo)準(zhǔn)品)Vitexin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

CoC1(懸浮) 卵巢癌牡荊素葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Glucosyl-vitexin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

MRC-5-EGFP+puro人胚肺成纖維細(xì)胞 MRC-5-EGFP+puro in human embryo lung fibroblasts MEM+10%Hyclone滅活血清+2ug/ml puromycin牡荊素鼠李糖苷（標(biāo)準(zhǔn)品）vitexin-2″-o-rhamnoside質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠肝癌細(xì)胞大鼠小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞(RAc)(5×105) Ishikawa, 人內(nèi)膜癌細(xì)胞系 Human[Tyr34]-甲狀旁腺激素(7-34) 酰胺 (牛)[Tyr34]-pTH (7-34) amide (bovine)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO E6[Trp4]-Kemptide[Trp4]-Kemptide質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

FIGF Others Mouse 小鼠 VEGF-D / VEGFD / FIGF 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (Z)-4-羥基它莫西芬(Z)-4-Hydroxytamoxifen質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

中性蛋白酶(含10mL酶解緩沖液) 1mL拉寧A2 Teicoplanin A2質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

CAL 27-EGFP-puro(pLVT7慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)人舌鱗癌細(xì)胞 CAL 27-EGFP-puro (pLVT7 leiviral consuct stable sain) of human tongue squamous cell carcinoma DMEM+10% FBS+2μg/ml puromycin泰諾福韋1酸鹽Tenofovir Phosphate質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口
細(xì)胞接受后的處理：
1） 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。
2） 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的的*培養(yǎng)基。
4） 如果細(xì)胞長(zhǎng)滿（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代。
5） 接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，